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有了 BCRANK包,轻松搞定TFBS 分析,如果同学们遇到任何生信问题,随时来找小师妹讨论哦!
在本次学习中,我们将从 BCRANK 包的安装开始,逐步掌握如何用它预测 DNA 序列中的 motif,并学习如何可视化位权矩阵,以及如何定位与 motif 匹配的结合位点。通过实际操作,同学们将了解 BCRANK 的工作流程,掌握核心命令和常见分析步骤。相信通过今天的学习,同学们会更加熟练地使用 BCRANK 包,在基因组调控和生物信息学分析领域中迈出重要的一步!接下来,让我们一起开启 BCRANK 的学习之旅吧!
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BCRANK包介绍
BCRANK 包用于识别基因组序列中的转录因子结合位点(TFBS)。它通过迭代算法优化从一组候选序列中提取的核苷酸序列模型,进而预测转录因子的潜在结合位点。BCRANK 包特别适用于处理长的或较复杂的序列。常用函数包括 bcrank(执行预测)、matchingSites(提取预测位点)等,能够方便地将结果进一步分析,如结合位点的序列、位置和评分。这个工具在生物信息学中广泛应用,帮助研究调控元件及其功能。
BCRANK包安装
需要R语言版本为4.4,在控制台中输入以下命令:
if (!require("BiocManager", quietly = TRUE))
install.packages("BiocManager")
BiocManager::install("BCRANK") #在BiocManager环境下安装BCRANK包
查看是否安装成功:
packageVersion("BCRANK") # 查看BCRANK版本
显示为1.66.0版本,则表示已经安装了BCRANK包。
除此之外,后续示例还需要使用seqLogo包,我们可以提前安装,安装命令如下:
BiocManager::install("seqLogo") # 在BiocManager环境下安装seqLogo
使用BCRANK包识别给定DNA序列中的潜在转录因子结合位点
本篇文章文章所使用的代码、示例数据或基因集等,关注公众号回复【666】获取哦~编号:241123
载入需要用到的包和数据
首先,我们需要载入本次学习的主角——BCRANK包,代码如下:
library(BCRANK) # 载入BCRANK包
除此之外,后续进行序列可视化还需要用到seqLogo包,我们可以提前载入:
library(seqLogo) #载入seqLogo包
BCRANK包需要包含已排序序列的 FASTA 文件作为输入。本文中我们将采用从人类肝细胞系 HepG2 中进行全基因组 ChIP-chip 实验得到的 2500 个排序区域数据作为示例。
载入示例数据的命令如下:
fastaFile <- system.file("Exfiles/USF1_small.fa", package="BCRANK") # 加载示例 FASTA 文件,文件中包含从人类肝细胞系 HepG2 中的全基因组 ChIP-chip 实验中获得的 2500 个排序区域。
使用bcrank()函数预测DNA序列中的motif
载入示例数据后,我们就可以使用BCRANK包中的核心函数bcrank()来预测DNA序列中的motif,在 DNA 中,motif 通常是一些短的核苷酸序列,它们与特定的生物功能相关,如转录因子识别和结合位点。代码如下:
set.seed(0) # 设置随机数生成器种子,确保结果可重复
BCRANKout <- bcrank(fastaFile, restarts=25, use.P1=TRUE, use.P2=TRUE) # 运行 BCRANK 算法,使用的输入文件是 fastaFile,restarts 参数设为 5,使用了 P1 和 P2 方法来优化 motif 发现过程
运行时间可能较长,需要同学们耐心等待,如果希望预测的准确度提高,可以适当提高restarts 参数的值。
BCRANKout # 运行结束后,显示 BCRANK 算法输出结果,列出了预测的前 5 个 DNA motif 及其得分
结果如上图,显示了前5个DNA motif的得分,可知得分最高的motif为“GTCACGTG”序列
接下来我们可以把这个motif的预测结果提取出来进行可视化分析,代码如下:
topMotif <- toptable(BCRANKout, 1) # 提取 BCRANK 结果中得分最高的 motif
topMotif # 显示得分最高的 motif 及其相关信息,如位权矩阵和搜索路径
显示结果上图,可以看到“GTCACGTG”这个motif的搜索路线,以及位权矩阵,我们可以使用seqLogo包把位权矩阵可视化,代码如下:
weightMatrixNormalized <- BCRANK::pwm(topMotif, normalize=TRUE) # 生成归一化的位权矩阵(PWM),将 motif 的权重值标准化,使之更适合可视化
seqLogo(weightMatrixNormalized) # 使用 seqLogo 包来可视化位权矩阵,显示出每个碱基在 motif 各个位置的权重信息
显示结果如下图:
使用matchingSites()函数预测DNA序列的结合位点
通过以上的分析,我们已经找到了得分最高的motif,接下来我们可以使用BCRANK中的matchingSites()函数来在DNA序列中查找和报告与该motif匹配的结合位点。代码如下:
# 提取得分最高的motif共识序列
topConsensus <- as.character(toptable(BCRANKout)[1,"Consensus"])
# 打印最高得分的motif共识序列
print(topConsensus)
# 输出为 "GTCACGTG"
# 查找输入fasta文件中与topConsensus ("GTCACGTG") 匹配的结合位点
bindingSites <- matchingSites(fastaFile, topConsensus)
# 统计预测到的结合位点数量
nrSites <- nrow(bindingSites)
# 输出结合位点的数量
cat("Number predicted binding sites:", nrSites, "\n")
# 输出:预测的结合位点数量为 842
print(bindingSites[1:15,]) # 打印前 15 个结合位点的详细信息
结果如下图:
上图显示了 DNA 序列中预测的结合位点信息。每一行代表一个结合位点,包含区域(染色体或片段位置)、序列编号、起始和结束位置、链的方向(正链“+”或反链“-”)以及匹配的序列。比如,第1行和第2行表示同一区域的不同链上的匹配序列,由于共识序列是回文结构,因此在正链和反链上都报告了相同的结合位点。
以上就是对 BCRANK 包的所有介绍了,通过本文,我们了解了 BCRANK 包在识别基因组序列中的转录因子结合位点(TFBS)方面的应用。BCRANK 通过迭代算法优化从候选序列中提取的核苷酸序列模型,预测潜在的结合位点,并生成位置权矩阵,便于进一步分析和可视化。希望同学们能够继续深入学习和探索 BCRANK 包,通过不断的实践和应用,大家一定能在转录调控及基因组功能研究中取得不错的进展和成果。
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