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acculase,serio-el,cryostro,
split 2个6well 到6个6well: 【split】:coat:remove geltex,+seriol el 1.7ml,+300ul cells,+r.c20ul。Collect:remove,+PBS-,+auuctate 3min,+seriol 1000rpm 3min,resupend 1ml,300ul/well,3个6w
feed:6个6w。【feed】Remove,+SERIOL EL 6ml。【tips】(每天2ml)
feed,6个6w:【feed】:remove,+SERIOL EL 3ml/per well
【tips】mature D90 changeEGF+HLF to BMP4+HLF
"mature:24个24w,【mature】+seriol no EL 600ul,+BMP4 6ul,+LIF 6ul(600ul个24w=1440ul=15ml(15ml SERIOL,15ul BMP4,15ul LIF)):remove,+600ul perwell
【tips】 D90 changeEGF+HLF to BMP4+HLF"
mature feed:24个24w,【mature feed】-all remove,+500ul seriol no EL(24孔板24孔)
watch
"PFA: 24✖️24w,clean with \4% PFA\ 500ul,friege 【calculate】: \4%PFA\:24/24w✖️500ul=12000ul, 、\37%PFA\ to 12000ul \4%PFA\:12000ul/37/4=1297ul, 、\PBS\:12000-1297ul \37% PFA\=10721ul 、10721ul \PBS+1297ul \37%PFA\=12000UL \4%PFA\ 【Protocol】
Sample preparation. (immunocytochemistry)
"icc day1 11:30-15:00 🫐
Immunostaining protocol
"ICC Day2 08:00-14:00 🫐🫐🫐🫐
"
"4度存放拨片 18:00-18:01🥥
黑暗状态下干燥后的拨片存储在盒子里,放置在进门冰箱下层"
"显微镜培训14:00-15:00🍎
Bioimaging - Laser Scanning Confocal Microscope (LSM800) 生物成像 - 激光扫描共焦显微镜 (LSM800)
团队教学 两个按钮,1.5小时休息, 日历记录, 数量内容
软件: zenblo---左按钮--calablite now--
观察: 活体自我曝光(一般是246.229ms,如果太高会不真) d盘放置活体 ,继续这台没用区别 就关掉激光灯,长时间对样本会损伤。
拍摄: 采集方式--智能设置--设置三个设备 显微镜光学原理? z-stack- 设备+z-stack 尺寸: 采集方式--位深:12? 显示(右下角,调节,图像好,是一样的) ) 信息是指,详细信息 图:加标尺
保存为: Cz D-user-lab 上传googledrive "
"Split astrocycles 20ml 小瓶子 1:4 下层 16/11/2023 18:06 🥥 ·~1 small bottle 1:4 4 small bottle 20ml小瓶子,coat with geltex 2ml wait at least 2h Remove all media in one bottle,wash with PBS 1滴管,+EDTA 1滴管 4min - Remove geltrax in 4 coat bottle,add 2滴管 SERIO 命名(NAS2 umAPC NA D92 D0 21/4/23 16/11/23 D92) Collect cells with SERIO 2滴管,split to 4 coat bottle 拧紧瓶口后松开一点点 酒精消毒下层恒温箱"
2个6w,1个freeze。1个split to 4个6w。 【Split 1:4】:remove,+pbs-,+acculase 3min-,+serio 1ml 3次collet 1000rpm 3min,+seriol 1ml resuspend,+250ul/well seriol to coat plate,+750ul serio-EL/well,20ul r.c/well。 【1个6w freeze】:remove,+PBS-,+auuclase 3min-,+seriol-EL 1ml 3次,1000rpm 3min,+cryostro 500ul,收集-80。 【命名】cell line+area+well size+media+date+age:nas2 ctx 1x6w serio 19.9.23 D85