nathaliaraquelx
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3 years ago Nosso objetivo primário é realizar um teste rápido para diagnóstico da COVID19 e para isso iremos expressar a B38CAP na membrana externa com a adição de uma GFP para quantificarmos os resultados.
Bibliografia: Através de ligações não covalentes a RBD e a ACE2 realizam suas interações que contribuem para a endocitose do corpo viral pela célula. Com isso, verificamos que a ACE2 e a Spike são proteínas glicosiladas e que interagem através dos oligossacarídeos associados a proteína. Pensando pela parte bioquímica, começamos a estudar a expressão de oligossacarídeos em procariotos e verificamos na literatura que existem moléculas similares, com mesmas funções.
E como você faz isso de expressar oligossacarídeos de células eucarióticas em células procarióticas?
A B38CAP é uma carboxipeptidase homóloga a ACE2. Pretendemos expressar os oligossacarídeos ligados no N-terminal da B38CAP em membrana fusionada a GFP. A prova de conceito será a correlação de expressão de GFP com presença de vírus na amostra, tornando possível a utilização dessa tecnologia para um teste.
Então nosso objetivo primário é realizar um teste diagnóstico rápido para a covid-19 e para isso iremos expressar a B38cap na membrana externa com a adição de uma GFP para quantificarmos os resultados. Percebemos que através de ligações não covalentes a RBD e a ACE2 realizam suas interações que geram a endocitose do corpo viral. E verificamos que a ACE2 e a Spike são proteínas glicosiladas e o que realiza essa ligação são oligossacarídeos associados a proteína. Então pensando pela parte bioquímica começamos a estudar sobre a expressão de oligossacarídeos e verificamos na literatura que existem moléculas similares capazes de realizar a mesma função em células diferentes. E como você faz isso de expressar oligossacarídeos de células eucarióticas em células procarióticas? Você pega uma outra proteína de uma célula procariótica que apresente uma atividade e configurações parecidas. Com isso lembramos da B38cap, uma molécula que apresenta a mesma atividade catalítica da ACE2. E inferimos disso que, também seria possível colocar esses oligossacarídeos para serem expressos com a B38cap na membrana externa. E o que estamos pensando em fazer para a transdução de sinal é que quando tiver essa ligação com o oligossacarídeo ela expresse a GFP. Há um estudo que realizou isso em leveduras com uma biblioteca de expressão, eles fizeram com mutantes da ACE2 para melhorar o binding com o vírus, é como um ensaio imunológico. No qual você tem a levedura expressando a ACE2 junto com a GFP na membrana e quando tem a ligação do spike com a ACE2 e você adiciona o Alexa Fluor e assim consegue ver a expressão da GFP tornando possível de quantificar as amostras. Através de uma correlação de quanto de vírus você tem na sua amostra com a expressão dessa proteína fluorescente tornando possível a utilização dessa tecnologia para um teste