Closed cwarden45 closed 4 years ago
Hi Charles,
I've just re-run step1-to-5 from the scripts in the GLIMPSE/test folder and I did not encounter any problem. Can you please try to run the same scripts (adapting step1 to your environment) and see if everything runs smoothly?
Regarding bcftools, unfortunately I don't have enough information to say why you encounter the segfault, but please keep the -Ai parameter. Another problem I see here is that you might mix different genome builds/chromosome annotations. In the tutorial what we do is to download the reference panel in build38 and change the name of the chromosome from "22" to "chr22" (as usual in b38). Therefore I don't understand why you get an input region in this form: "22:47069138-50805809" instead of "chr22:47069138-50805809". The target and input files must have the same chromosome name in order to allow random access.
Hope this helps. Best wishes, Simone
Hi Simone,
Thank you - I had to go back and change the chromosome names file at a later step (when the original code didn't actually produce the expected file). I am not sure if that caused the chromosome issue that you are describing, but I expect that I will need to also change something else.
Even if I don't solve the segmentation error problem with bcftools, I will repost what happens if I can at least look into that issue. If I can solve the bcftools issue, then I will also post that solution/explanation (for others).
Best Wishes, Charles
Changing the chromosome naming system fixed the segmentation error. I also added back in using "-T" for bcftools mpileup
.
However, I am still getting an error message at the GLIMPSE_phase
:
[GLIMPSE] Phase and impute low coverage sequencing data
* Author : Simone RUBINACCI & Olivier DELANEAU, University of Lausanne
* Contact : simone.rubinacci@unil.ch & olivier.delaneau@unil.ch
* Version : 1.0.0
* Run date : 06/07/2020 - 15:02:48
Files:
* Input VCF : [test/NA12878.chr22.1x.vcf.gz]
* Reference VCF : [/home/cwarden/CDW_Genome/1000_Genomes_BAMs/GRCh38_positions/ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.vcf.gz]
* Genetic Map : [/opt/GLIMPSE/maps/genetic_maps.b38/chr22.b38.gmap.gz]
* Output VCF : [test/GLIMPSE_imputed/NA12878.chr22.1x.13.bcf]
* Input region : [chr22:47069138-50805809]
* Output region : [chr22:47269166-50805809]
Parameters:
* Seed : 15052011
* #Threads : 4
* #Burnin : 10
* #Main : 10
* PBWT depth : 2
* PBWT modulo: 8
* Init K : 1000
Initialization:
Parsing specified genomic regions
* Input region [chr22:47069138-50805809]
* Output region [chr22:47269166-50805809]
* VCF/BCF scanning ...
ERROR: No variants to be phased in files
I also updated the GitHub code for my test, including a change to rename all of the references (when applying GLIMPSE to my own samples).
I will also update the name of the issue, to try and make it easier for others with similar problems to find this message thread.
Do you have any other troubleshooting suggestions?
Hi Charles,
Sorry for the delay in the answer. Also, sorry for asking again, but have you tried to run the scripts in the test folder as they are? I think it might help you to troubleshoot your scripts. On a normal machine, the full pipeline will take only few minutes, I really recommend to run it as it is.
I can't look in details at all your scripts, but please bear in mind that if you use bcftools to compute genotype likelihoods, please call them at all and only biallelic SNPs in the reference panel using the command provided. This is really important, otherwise you'll bias the results.
Regarding your specific problem, I'd check why GLIMPSE_phase does not find variants. It's a very odd behavior that might indicate that something the the previous steps went wrong. Have you checked what do you have in those regions for both the files?
i.e.:
bcftools view -r chr22:47069138-50805809 -H -G /home/cwarden/CDW_Genome/1000_Genomes_BAMs/GRCh38_positions/ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.vcf.gz
and
bcftools view -r chr22:47069138-50805809 -H -G test/GLIMPSE_imputed/NA12878.chr22.1x.13.bcf
they should be defined on the same variants and there should not be indels there, if you used bcftools.
Hope this helps,
Best wishes
Simone
Hi Simone,
No problem!
I had issues running the example code without any modifications (such as with creating the chromosome map file).
There is nothing within the test/GLIMPSE_imputed
folder.
While I can run the command, I don't see anything as the output for the bcftools view -r chr22:47069138-50805809 -H -G /home/cwarden/CDW_Genome/1000_Genomes_BAMs/GRCh38_positions/ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.vcf.gz
command.
If I decompress and view the down-sampled .vcf.gz file, then this is what I see with tail NA12878.chr22.1x.vcf
:
chr22 50802673 . A T . . . GT .
chr22 50802674 . T C . . . GT .
chr22 50802857 . T G . . . GT .
chr22 50802870 . T G . . . GT .
chr22 50802881 . C T . . . GT .
chr22 50802914 . C A . . . GT .
chr22 50802958 . C G . . . GT .
chr22 50805735 . A G 57 . DP=3;MQ0F=0.666667;AC=0;AN=2;DP4=0,3,0,0;MQ=9 GT:PL:DP 0/0:0,9,30:3
chr22 50805777 . C T . . . GT .
chr22 50805809 . C T . . . GT .
If I do the same for the end of the decompressed tail ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.vcf
file, then this is what I see:
22 50802673 rs562711702 A T 100 PASS AC=7;AF=0.00139776;AN=5008;NS=2504;DP=22847;EAS_AF=0;AMR_AF=0;AFR_AF=0.0045;EUR_AF=0;SAS_AF=0.001;AA=.|||;VT=SNP;GRCH37_POS=51241101;GRCH37_REF=A;GRCH37_38_REF_STRING_MATCH GT 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 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I am not sure when I will be able to look into this more. However, it looks like the issue is that I need to use the ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.rename.vcf.gz file.
For example, this is what the end of that file looks like:
chr22 50802673 rs562711702 A T 100 PASS AC=7;AF=0.00139776;AN=5008;NS=2504;DP=22847;EAS_AF=0;AMR_AF=0;AFR_AF=0.0045;EUR_AF=0;SAS_AF=0.001;AA=.|||;VT=SNP;GRCH37_POS=51241101;GRCH37_REF=A;GRCH37_38_REF_STRING_MATCH GT 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 0|0 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Once I can confirm, then I will close this ticket.
Thank you very much!
Sincerely, Charles
Hi Charles,
Sorry to hear you can't run the testing scripts. Will try to simplify the process in the future.
From what I see here, yes, the reference and target files must have the same chromosome name, therefore that might cause the problem for GLIMPSE_phase. Hopefully you can just use your ALL.chr22_GRCh38.genotypes.20170504.rename.vcf.gz
file and everything should run smoothly.
Hope you solved the problem and you are finally able to run GLIMPSE!
Best wishes, Simone
Fixing the genotype file name helped, and I think it probably solved the problem.
However, I am now working on the ligate step, and I am getting some error messages.
That is a separate issue where I understand I need to take some time on my own troubleshooting before asking other questions.
However, I can now show you the output of one the commands that you previously asked about:
$/opt/bcftools-1.10.2/bcftools view -r chr22:47069138-50805809 -H -G test/GLIMPSE_imputed/NA12878.chr22.1x.13.bcf | head
chr22 47069138 . T C . . RAF=0.000199681;AF=1.48042e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069176 . G A . . RAF=0.00998403;AF=9.11678e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069229 . C T . . RAF=0.0081869;AF=1.26255e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069240 . C A . . RAF=0.000199681;AF=1.25984e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069249 . G T . . RAF=0.0175719;AF=1.26447e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069277 . A G . . RAF=0.000199681;AF=1.25904e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069285 . G T . . RAF=0.000199681;AF=1.26407e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069289 . C G . . RAF=0.00858626;AF=5.15704e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069320 . C G . . RAF=0.000199681;AF=2.51207e-05;INFO=0;BUF=1
chr22 47069354 . C T . . RAF=0.000199681;AF=5.09401e-05;INFO=0;BUF=1
Does it look like the GLIMPSE_phase
step worked? If so, I will close this ticket.
I figured out the issue with the ligation step (I needed to remove ".imputed" in the name of the input files to define in a list).
So, I can produce a .vcf after running all the steps (and converting the .bcf to .vcf), and I am closing this ticket.
Thank you very much for your help!
Hi,
Thank you very much for putting together this program.
I have encountered the following issues:
1) If I run
bcftools call
exactly as specified in section 3.2 of the example, then I get a segmentation fault error message from bcltools.2) If I remove the
-Ai
parameters frombcftools call
(and separate the command into 2 separate commands), then I no longer get a segmentation error and I can produce a valid file. However, I get an error message fromGLIMPSE_phase
:While I hope to eventually update it with working code, you can see the commands that I am using here (where everything but the current step is commented out).
Have you encountered this problem before? If not, you know have any suggestions about what I might be able to try to troubleshoot this problem?
Thank you very much.
Sincerely, Charles